آزمایشگاه فیزیولوژی گیاهی

آماده سازی محلول ها

1.       فسفريك اسيد 6 مولار:41/12 ميلي ليتر اسيد فسفريك 85% با دانسيته Kg/L 68/1 به آب مقطر افزوده و سپس به حجم 100 ميلي ليتر رسانيد.

2.       سولفوساليسيليك اسيد 3%: 3 گرم پودر سولفوساليسيليك اسيد را در آب مقطر حل نموده و به حجم 100 ميلي‌ليتر رسانيد.

3.       اسيد ناين‌هيدرين: مقدار 1/25 گرم پودر اسيد ناين‌هيدرين را در 30 ميلي‌ليتر اسيد استيك گلاسيال حل نموده و سپس 20 ميلي‌ليتر اسيد فسفريك 6 مولار آماده‌شده به آن اضافه گردد.

4.       استاندارد 100 ميلي­گرم­در­ليتر پرولين: 0.01 گرم پرولين را در آب مقطر حل نموده و به حجم 100 ميلي‌ليتر رسانيد.

5.       استانداردهاي 0, 4, 8 , 12, 16 و 20 ميلي­گرم­در­ليتر پرولين: به ترتيب 0, 2, 4, 6, 8 و 10 ميلي ليتر از استاندارد 100 ميلي­گرم­در­ليتر پرولين برداشته و با آب مقطر به حجم 50 ميلي‌ليتر رسانيده شود.

1. تولوئن.

روش كار:

1.       0/5 گرم مادة تر گياهي را با هاون خرد شده و درون يك تيوب ريخته  سپس 10 ميلي‌ليتر سولفوساليسيليك اسيد 3% آماده‌شده را به آن اضافه نموده و نمونه را درون يخ قرار داده شود.

2.       تيوب را در 15000 دور به مدت 10 تا 15 دقيقه در دماي 4 درجة سانتي‌گراد سانتريفوژ نموده تا مواد اضافي از محلول جدا گردد. می­توان به جای سانتریفیوژ از قیف شیشه­ای و کاغذ صافی برای صاف کردن نمونه ها استفاده کرد .

3.       مقدار 2 ميلي‌ليتر از عصارة صاف شده را درون تيوب جديد ريخته و 2 ميلي‌ليتر اسيد ناين‌هيدرين و 2 ميلي‌ليتر اسيد استيك گلاسيال به آن افزوده و سپس خوب مخلوط شود.

4.       همزمان مقدار 2 ميلي‌ليتر از محلول­هاي استانداردصفر، 4، 8، 12، 16 و 20 ميلي­گرم ­در ­ليتر پرولين را درون تيوب­هاي جديد ريخته و 2 ميلي‌ليتر اسيد ناين‌هيدرين و 2 ميلي‌ليتر اسيد استيك گلاسيال به آن­ها افزوده و سپس خوب مخلوط شود.

5.       نمونه‌ها را در حمام آب گرم به مدت 1 ساعت حرارت داده و سپس درون حمام يخ قرار داده شود.

6.       مقدار 4 ميلي‌ليتر تولوئن به محلول اضافه نموده و آن را به مدت 20 ثانيه با دستگاه ورتكس به هم زده شود.

استانداردهاي پرولين محلول در فاز تولوئن را به اندازة لازم در كووت دستگاه اسپكتروفتومتر ريخته و مقدار پرولين را در طول موج 520 نانومتر قرائت كرده و منحني استاندارد رسم شد. سپس ميزان جذب در نمونه هاي گياهي را قرائت نموده و با قراردادن آن در معادله خط مقدار پرولين می آید.

توجه: نمونه‌ها و محلول ناين‌هيدرين را در دماي 4 درجة سانتي‌گراد نگهداري شود.

 منابع:

حسیبی، پ.، م. نبی پور و ف. مرادی. 1389. بررسی نقش برخی محافظت کننده های سرمایی در القای تحمل تنش دمای پایین به گیاهچه های برنج. مجله الکترونیک تولید گیاهان زراعی. جلد سوم، شماره اول، بهار 1389. صفحات 39-56

Bates LS, Waldern RP, Tear ID. 1973. Rapid determination of free proline for water stress studies. Plant Soil. 39:205-207.                             

Kramer, P.J. 1969. Plant and Soil water Relationships: A Modern synthesis. McGraw-Hill, Inc. New York.